技术原理

二硫键修饰是一种常见的蛋白质翻译后修饰形式，几乎存在于病毒、原核及真核的所有物种中。其为蛋白的多肽链间或链内的两个半胱氨酸的自由巯基之间提供共价交联，使蛋白能够维持正常的折叠形式、构成正确亚型、保持更高级别的构象以行使正常的生物学功能。对二硫键的还原或改变则会引起蛋白质活性的改变。
故，正确的二硫键的数目和位置是多肽和蛋白质产生生物活性的结构保证，在对合成或天然多肽产品研究的过程中，特别是蛋白制品或生物药的生产过程中，对二硫键配对状态的精确解析都是需要考察的重要内容之一。
在传统的方法中，二硫键的解析方法主要包括核磁共振、X射线晶体分析、Edman降解法等，这些传统方法的主要问题在于均依赖于蛋白纯化，且需求量比较大。随着质谱技术的不断发展，我们可实现基于质谱技术的低样品量的高精度、高灵敏度的二硫键鉴定。
在之前的基于质谱的二硫键的鉴定中，一般通过对蛋白或多肽还原前与还原后状态的比对，从而推断二硫键的位置。此方法对于复杂样品或单个蛋白内复杂的二硫键组成的解析较为困难。
我司实验方法基于2015年北京生命科学研究所的董梦秋研究员发表于Nature Methods上的文章Mapping native disulfide bonds at a proteome scale^[1]，并使用配套软件pLink 2^[2],实现在不对二硫键进行破坏的前提下，对质谱产出的复杂谱图进行解析，直接鉴定二硫键交联多肽。

参考文献：
[1] Lu S, Fan SB, Yang B, et al. Mapping native disulfide bonds at a proteome scale. Nat Methods. 2015;12(4):329-331. doi:10.1038/nmeth.3283
[2] Chen ZL, Meng JM, Cao Y, et al. A high-speed search engine pLink 2 with systematic evaluation for proteome-scale identification of cross-linked peptides. Nat Commun. 2019;10(1):3404. Published 2019 Jul 30. doi:10.1038/s41467-019-11337-z


 

二硫键分析技术原理图

                              cross-linked二硫键谱图示意

技术特点
l  提供包括样品制备在内的完整的解决方案；
l  鉴定结果准确度高。
 
样品要求
l  请确保蛋白浓度大于1mg/ml， 最小量不得低于50Pmol，蛋白纯度最好大于90%；
l  含盐量：挥发性无机盐<20mM；不挥发性无机盐<5mM；
l  样品尽量不要添加任何保护剂；
l  请使用足量的干冰运输，并尽量选用较快的邮递方式，以降低运输过程中样品降解的可能性。
 
项目报告
l  实验步骤；
l  LC-MS/MS参数；
l  质谱谱图
l  鉴定的蛋白二硫键的详细信息
 
二硫键分析一站式服务
l  您只需下单-寄送样品
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