技术原理
DIA（Data independent acquisition）是基于静电场轨道阱Orbitrap的一项全新的、全息式数据非依赖性采集定量技术。DIA将质谱的全扫描范围分为若干个窗口，高速、循环地对每个窗口中的所有离子进行选择、碎裂及检测，从而无遗漏、无差异地获得样本中所有离子的全部碎片信息。DIA无需指定目标肽段，且扫描点数均匀，利用谱图库即可实现定性确证和定量离子筛选，并可实现数据回溯。
目前主流的数据分析是基于DDA/DIA 构建的谱库和实验产生的数据对样品中的蛋白质进行鉴定和定量。公共的谱图库可以从各大蛋白质组研究数据平台下载，但对于一些特异性的样本，为了有更好的鉴定结果，还需要通过实验样本建立DDA参考数据库。
提取的蛋白酶解之后，利用液质联用技术对肽段进行质谱分析，通过比较不同样品中相应肽段的信号强度，从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。每条肽段的丰度（量）与其在质谱中的峰面积或信号强度成正比；而不同样品的同一条肽段在LC上的保留时间（retention time， RT）是一致的，因此，可以通过对比谱图库中的信息，再整合到相应蛋白，实现对蛋白质在不同样本中的相对表达水平的定量分析。

DIA定量蛋白质组学技术原理图

DIA定量蛋白质组学实验流程图

DIA定量蛋白质组学数据分析流程图

技术特点
l  重现性好：采集所有离子及碎片谱图，不丢失任何信息；
l  选择性好：基于碎片离子（即母子离子对）定量，与 SRM/MRM 相当；
l  准确度高：循环时间固定，扫描点数均匀，定量准确度高；
l  通量高：同时监测所有目标蛋白/化合物，通量无上限；
l  时效性强：对于易降解样品可以即刻采集，获得数据后再进行深入挖掘；
l  数据易追溯：即使目前的水平无法发现某些蛋白质/化合物，未来还可以回溯。

 
样品要求

l  常规动物组织（脑、心、肝、脾、肺、肾、肌肉、皮肤等）：送样量>200mg；
l  常规植物组织（幼嫩的根、叶、花、愈伤组织等）：送样量>1g；
l  悬浮/贴壁细胞：送样量>1x10⁷个细胞或体积>50ul细胞沉淀；
l  血浆/血清样本：送样量>500ul；
l  微生物菌体：送样量湿重>100mg或体积>100ul。
 
注意事项
l  在蛋白质制备过程中使组织始终置于冰上，离心机、离心管等仪器设备要提前预冷，以防蛋白质的降解；
l  要加入适量的裂解液，裂解一定要充分、均匀；
l  植物和动物组织样本一般采用研磨或匀浆机破碎处理，细胞和菌体样本一般采用超声破碎，破碎过程中要避免材料的融化；
l  对预处理好的材料，若不立即进行实验，应冷冻保存（－80℃），对于易分解的生物大分子应选用新鲜材料制备；
l  对于样本量需求少的研究，如果组织样品本身非常细小，可直接裂解，以减少蛋白质的损失。
 
项目报告
l  实验步骤
l  液相/质谱参数
l  质谱谱图
l  蛋白质的鉴定定量信息
l  生物信息分析

 
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