蛋白质纯度分析
技术原理
在许多生物学研究中,蛋白质纯度的高低直接决定了实验的成败,因此蛋白质的纯化以及纯度分析具有很重要的意义。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,简称SDS-PAGE)是比较常用的一种蛋白纯化分析技术。SDS-PAGE可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小不同所产生的迁移率的不同而将蛋白质分离。如果蛋白质样品中含有多个蛋白质或者纯化蛋白样品中含有其他杂蛋白,经过SDS-PAGE分离后不同的蛋白质会被分离成多个蛋白条带。如果纯化的样品中只含有同一种蛋白质,蛋白质样品电泳后,则只显现一条蛋白条带。由此SDS-PAGE技术可以对蛋白质样品的纯度进行分析。
蛋白质SDS-PAGE分析流程:
1)样品处理:在蛋白样品中加入等量含有β-巯基乙醇的2x loading buffer,煮沸10分钟;
2)电泳准备:配置合适浓度的SDS分离胶,安装电泳槽,注入1x的电泳液;
3)蛋白样品上样:根据蛋白质浓度,取适量处理过的蛋白样品依次加入电泳孔槽内,另外取适量蛋白标准marker加入其它空余孔槽内;
4)开始电泳:接通电源,将电压调至120v,保持电压恒定;
5)剥离胶:当溴酚蓝迁移至凝胶底部,停止电泳;将蛋白胶取出,并切去浓缩胶和分离胶底部的溴酚蓝胶条;
6)染色:使用R250染色液对蛋白胶染色1小时;
7)脱色:使用脱色液对染色的蛋白胶脱色至背景干净,蛋白条带清晰可见;
8)拍照分析。
蛋白质纯度分析技术原理图
技术特点
l 技术非常成熟,分析结果准确可靠。
样品要求
l 请使用足量的干冰运输,并尽量选用较快的邮递方式,以降低运输过程中样品降解的可能性。
项目报告
l 实验步骤;
l 相关的SDS-PAGE参数;
l 蛋白质纯度分析结果
蛋白质纯度分析一站式服务
l 您只需下单-寄送样品
l 明德正康为您完成-样品处理-上机分析-数据分析-项目报告