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蛋白质N端测序
技术原理
Edman降解法是蛋白质N端序列分析中非常广泛使用的方法。Edman降解测序是通过循环反应从蛋白质的N端开始逐个鉴定氨基酸的种类,从而对蛋白质的N端序列进行测定。每一个Edman测序反应包括3步:第一步是在碱性条件下,PITC与蛋白N端的游离氨基结合;第二步是在酸性溶液中,N端残基被切除;第三步是PITC结合的残基转化成为更为稳定的PTH残基,经过在线的HPLC分析,根据洗脱时间确定氨基酸种类。具体实验过程如下:1)在蛋白质测序前,蛋白样品首先经过SDS-PAGE的分离,保证样品的纯度;2)将SDS-PAGE上的蛋白样品转移到PVDF膜上,经过染色确定把蛋白条带切出;3)使用Edman测序仪对得到的PVDF膜上的蛋白样品进行分析。

 

蛋白质N端测序技术原理图

技术特点
l  操作简单方便
l  应用领域广泛
 
样品要求
l  样品需要量在1-10ug;
l  纯度最好能达到95%以上;
l  Buffer中不要使用表面活性剂,并尽可能降低溶液的盐浓度。
 
注意事项
l  请使用足量的干冰运输,并尽量选用较快的邮递方式,以降低运输过程中样品降解的可能性。
 
项目报告
l  实验步骤
l  质谱参数
l  质谱谱图
l  蛋白质N端测序的详细信息
 
蛋白质N端测序一站式服务
l  您只需下单-寄送样品
l  明德正康为您完成-样品处理-上机分析-数据分析-项目报告
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